钙离子的作用
:钙离子是细胞信号传导的关键第二信使。许多离子通道(如 TRP 通道家族,包括 TRPA1)在激活后允许钙离子从细胞外流入细胞内,或从细胞内储存(如内质网)释放,从而引起细胞内钙离子浓度([Ca²⁺]i)的瞬时升高。这可以通过荧光染料或指示剂来监测
检测方法
:实验使用钙离子敏感的荧光染料(如 Fluo-4、Fura-2 或 Calcium Green),这些染料在结合钙离子后荧光强度会增强或波长发生变化。通过荧光显微镜、流式细胞仪或多孔板读仪(如荧光酶标仪)实时监测荧光信号,从而量化钙离子流动。
:对于 TRPA1b,温度变化可激活通道,导致钙离子流入。实验可以比较野生型和突变型通道的响应差异,或测试抑制剂/激活剂的效果。 该实验的优势在于高通量、实时性和灵敏度高,但需要细胞处于健康状态,且染料加载均匀。