主要需要解决的问题:

问题1、确认显微镜本身参数正确(如激发光和发射光具体设置、机器本身操作)

问题2、什么样的流速对细胞不会产生过大影响(如将细胞冲散、将死细胞吹带到实验视野下等)

问题3、6皿细胞的具体实验操作(具体到每一皿该如何操作,探讨什么样的问题,有什么样的变量)

问题4、规范化的实验流程

解决措施及具体实验步骤

问题1:请教 祖老师学生及吴工调整确认机器,具体为激发波长为340和380,设置发射波长为510

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问题2:使用单皿细胞进行测试,调节流速从60至180rpm,观察视野下细胞状态,是否存在被冲刷掉的情况,同时确认进入导流管的摆放位置是否会对本实验产生影响。

实验时同步记录不同转速下导流管将培养基导入的具体时间,以及测试视野下340和380空载的变化曲线是否正确,从而确认问题一得到解决

问题3:

具体实验先不开启机器拍摄1min,随后开启机器导入1min的空白培养基,后切换各自添加不同变量的培养基进行记录

第一皿进行流速测试,确认对于激动剂抑制剂添加的最适流速(需要结合降温条件进行测试)(同步确认机器已经调试正确)

第二皿只添加激动剂

第三皿只添加抑制剂

第四皿激动剂抑制剂一起加入