1.前期准备

1.1 Cal-520染料配置（适用于需要用Cal-520染料的实验方案）

**Cal-520AM储存液（5mM）：**单只染料是50ug液体，需需在每瓶中加入9.07微升的DMSO，充分涡旋混匀，离心，制备5mM的储备液，置于-20℃保存。在实验当天，用DMSO溶解Cal-520@AM或将等份的指示剂储备液解冻至室温。（货号：21130，10*50ug装）
**20% Pluronic F-127储存液配制：**打开瓶子，往粉末中加入 XXML DSMO，37℃-50℃水浴至完全溶解，配制成20% ****Pluronic F-127储存液，室温保存。低温会导致固体析出，如果置于4℃保存，实验前需要置于水浴锅中溶解。（货号：ST501-1g，1g装）
**Cal-520AM工作液（5uM）：**首先需要配置0.04%Pluronic F-127的HBSS，用于溶解Cal-520AM储存液。

Pluronic F-127工作液配置 1 ml 10ml

20%的储存液 2 uL 20 uL

HBSS（Hanks缓冲液） 998 uL 9980 uL

Cal-520AM工作液配置（5uM） 1ml 10ml

Cal-AM 1uL 20uL

Pluronic F-127（工作液） 999uL 9980uL

Cal-520AM工作液的浓度需要自行摸索，说明书推荐的是4-5uM的浓度，目前24孔板的上样量是每孔500uL-1000uL。工作液均需要现用现配，按照当天的量配置合适的体积。

Pluronic F-127工作液配置	1 ml	10ml
20%的储存液	2 uL	20 uL
HBSS（Hanks缓冲液）	998 uL	9980 uL

Cal-520AM工作液配置（5uM）	1ml	10ml
Cal-AM	1uL	20uL
Pluronic F-127（工作液）	999uL	9980uL

**100 mg/mL DMSO溶液配置：**这里一次性配置50ML，称取5gDMSO（4.57ml），加dd水，定到50mL，包上锡纸避光保存。
**AITC储存液（1 mM）：**称取1mg AITC于15ML离心管中，加入10.0857 mL 100mg/ml DMSO，涡旋混匀，避光-20℃保存。配置完成后，分装冻存，避免反复冻融。（货号：HY-B1515，说明书：Allyl isothiocyanate (AITC) | 抗菌/抗癌剂 | MCE）。
**HC030031储存液（1 mM）：**取1mg HC030031粉末，加入2.8138 mL 100mg/ml DMSO，（货号HY-15064 ，说明书：https://www.medchemexpress.cn/HC-030031.html）
激动剂抑制剂的工作液浓度，需要确认

培养基配方：10% FPS+1%PS（按照293T细胞的来）

冻存液配方：直接使用细胞冻存液，或者使用10%DMSO+90%DMEM

EX/EM：488mm 520mm（不记得了，明天看一下，是和EGFP一样的）

在培养过程中就可以用EGFP的channel扫描看一下，可以看到未经处理细胞也会有微弱的绿色荧光。因为细胞本身就是含有钙离子。