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(A)原代性腺细胞活体钙成像的实验设计。在成像前至少72小时将原代细胞接种在层粘连蛋白覆盖片上,并保持在26˚C或31˚C。在成像当天,细胞被负载CaL-520-AM 1.5h,用HBSS洗涤,并连接到(B)详述的灌注室。(B)使用带有Peltier元件的直列式加热器/冷却器来快速修改HBSS的温度。该加热器/冷却器连接到具有相邻温度传感器的温度控制系统。HBSS在重力的作用下通过加热器/冷却器进入滑动室,并在真空中被吸入以在细胞间产生流动。

需要做的事情

  1. 培养皿钻孔,保持水位一致(1.4完成)
  2. 盖玻片铺皿的手法需要确认(1.4完成)
  3. 需要一个能达到6℃降温的方案
  4. 转染细胞的量