50微升体系，即25微升高保真酶，15微升dd水，5微升上游和5微升下游引物，使用NF-κb质粒为模板。程序使用高保真酶程序。
50微升体系，即25微升高保真酶，15微升dd水，5微升上游和5微升下游引物，分别使用罗非鱼和南极鱼的DNA(基因组）为模板。程序使用高保真酶程序。
制作大孔胶，将产物全部打入120V跑胶25min，使用DNA琼脂糖胶回收试剂盒切胶回收纯化上述产物。跑完胶可根据片段大小确定pcr是否成功。
将切胶回收的产物，使用爱博泰克的同源重组酶：2X MultiF Seamless Assembly Mix (RK21020)进行同源重组。同源重组的程序和反应体系如下：
使用DH5a感受态细胞进行转化，操作过程见说明书。（将同源重组的产物全部打入）
（1）取出感受态细胞（快速）置于冰上融化，分装每管50微升即可
（2）加入5-8微升的已连接片段，轻轻混匀，在冰浴中中静置30min
（3）42℃水浴中热激45s——60s（注意此时感受态极其脆弱，不要摇晃）。快速取出置于冰上冰浴，2-5min，不要摇晃离心管。
（4）向每个离心管中加入500微升培养基（LB培养基）（无抗），混匀后置于37℃，200rpm中培养1h。
（5）2000rpm离心3min，弃上清
（6）将沉淀20微升涂平板（相应抗性），倒置37℃（培养过夜12-14h），不超过24h